隨著飼料工業的快速發展,飼料產量迅速增長,飼料中蛋白質含量的測定顯得日益重要,雖然粗蛋白測定無法鑒別三聚氰胺和尿素等物質,但是在目前條件下,飼料中粗蛋白的測定仍然是評價飼料營養價值的重要指標。飼料中蛋白質的含量是評價其質量高低的主要指標。因此,蛋白質的測定一直是我們國家商品檢驗中十分重要的項目。

　　幾年來,隨著經濟的發展,一些不法商販常在食品和飼料中摻假作偽,謀取暴利。所以,如何準確快速測定其中的成分,已成為各監督行業執法的重要依據。飼料中粗蛋白的測定大致分為兩種:凱氏定氮法和自動定氮儀法。自動定氮儀法中要用到的粗蛋白測定儀是利用凱氏定氮原理,快速自動地進行蒸餾、滴定和計算。

　　實驗用粗蛋白測定儀對飼料中粗蛋白的測定如下：

　　1、實驗原理：凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。

　　2、試劑：硫酸、混合催化劑、氫氧化鈉、硼酸、混合指示劑、鹽酸標準溶液、 蔗糖、硫酸銨、硼酸吸收液。

　　3、儀器設備：粗蛋白測定儀、樣品粉碎機或研缽、分樣篩、分析天平、消煮爐或電爐、滴定管、凱氏燒瓶、凱氏蒸餾裝置、錐形瓶、容量瓶、消煮管。

　　4、試樣的選取和制備：選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化。

　　5、分析步驟

　　（1）試樣的消煮：稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）準確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4g混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，將 凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力 （360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然后再繼續加熱，至少2h。

　　（2）氨的蒸餾：將試樣消煮液冷卻，加入20mL蒸餾水，轉入100mL容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶內。蒸汽發生器 的水中應加入甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。準確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內，然后停止蒸餾。

　　（3）蒸餾步驟的檢驗：精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按（2）步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。

　　（4）滴定：用（2）或（3）法蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L鹽酸標準溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。

　　6 、空白測定：稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第5章進行空白測定，消耗0.1mol/L鹽酸標準溶液的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol/L鹽酸標準溶液體積不得超過0.3mL。

　　7、 分析結果的表述

　　計算見下式：

　　粗蛋白質（％）=（V2-V1）?c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100

　　式中：V2── 滴定試樣時所需標準酸溶液體積，mL；

　　V1── 滴定空白時所需標準酸溶液體積，mL；

　　c── 鹽酸標準溶液濃度，mol/L；

　　m── 試樣質量，g；

　　V── 試樣分解液總體積，mL；

　　V── 試樣分解液蒸餾用體積，mL；

　　0.0140── 與1.00mL鹽酸標準溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相當的、以克表示的氮的質量。

　　6.25── 氮換算成蛋白質的平均系數。

　　重復性

　　每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。

　　當粗蛋白質含量在25％以上時，允許相對偏差為1％。

　　當粗蛋白含量在10％～25％之間時，允許相對偏差為2％。

　　當粗蛋白質含量在10％以下時，允許相對偏差為3％。